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来自宋兆辉的问题

  想知道无菌上清液中有多少蛋白应该用什么方法我现在有一株对植物病原真菌有作用的细菌,现象了解下其无菌上清液中有多少蛋白,老师说让跑下电泳,但是对于液体中的蛋白的分子量完全不

  想知道无菌上清液中有多少蛋白应该用什么方法

  我现在有一株对植物病原真菌有作用的细菌,现象了解下其无菌上清液中有多少蛋白,老师说让跑下电泳,但是对于液体中的蛋白的分子量完全不知,请问这种情况下我该如何跑电泳,或者其他方法?

3回答
2020-08-23 15:40
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林胜利

  你可以跑个SDS-PAGE电泳,然后考马斯染色,通过这个电泳可以计算出分子量,然后根据条带的强度判断蛋白的含量.

  如果你对于自己的制胶缺乏信心,可以使用一些公司卖的梯度胶,然后加上Marker就可以直接看分子量.

  也可以用吸光的方法,利用蛋白的芳香族氨基酸特有的紫外的吸光峰,制作标准曲线,读取浓度.标准曲线你可以用BSA来做.

2020-08-23 15:44:56
宋兆辉

  能否说下具体的步骤呢?Marker如何选择?

2020-08-23 15:47:35
林胜利

  就是你制备一下自己的蛋白样品(这个不能不会吧?)然后加上SDS-LoadingBuffer。煮沸5min。这就是跑胶的样品了。胶你可以自己做,也可以从外面买。PAGE胶的制作方法网上都有。我建议如果不缺钱可以买4%~15%的胶,很好用的。然后往电泳槽插上胶,密封好。灌注RunningBuffer淹没胶的上下两端。RunningBuffer主要含有Tris8和SDS,都有配方。然后把样品点样跑胶就成了。Marker的话,随意,只要你有他的资料就行,知道它有几个带,都是多大。

2020-08-23 15:48:48

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