硫酸铜、酒石酸钾钠的碱性溶液中生成紫红色络合物,在这种比例的碱性水溶液中,本来形成的Cu(OH)2会与溶液中多余的OH-形成[Cu(OH)4]2-络离子,酒石酸钾钠的作用就是保护这种络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效向试剂中加入碘化钾,可延长试剂的使用寿命.

　　双缩脲法双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量.

　　双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂.它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制.当底物中含有肽键时（多肽）,试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色.可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm.鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml.

　　　双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替.