大肠杆菌的检测指标和方法

　　大肠杆菌的检测原理：

　　大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,该菌主要来源于人畜粪便,因此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能.食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示.

　　2.所需的仪器设备与器具：

　　2.1恒温培养箱：36±1℃.

　　2.21000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管.

　　2.3接种针.

　　2.4显微镜.

　　2.5超净工作台.

　　2.6玻片、酒精灯、洗耳球、试管架.

　　2.7天平：感量0.01g.

　　2.8灭菌釜.

　　2.9培养皿（直径为90mm）、试管,经121℃、30分钟灭菌.

　　2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片3.培养基及试剂：

　　3.1乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制,灭菌.

　　3.2伊红美兰琼脂平板：按照制造厂家使用说明进行配制,灭菌.

　　3.3乳糖发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制,灭菌.

　　3.4革兰氏染色液.

　　3.4.1结晶紫染色液：

　　结晶紫1g

　　95%乙醇20ml

　　1%草酸铵水溶液80ml

　　将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合.

　　3.4.2革兰氏碘液：

　　碘1g

　　碘化钾2g

　　蒸馏水300ml

　　将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300ml.

　　3.4.3沙黄复染液：

　　沙黄0.25g

　　95%乙醇10ml

　　蒸馏水90ml

　　将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释.

　　3.5生理盐水.

　　4.检验程序：

　　检样

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　　稀释

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　　乳糖胆盐发酵管,36±1℃,24±2hr

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　　不产气产气

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　　大肠菌群阴性伊红美兰琼脂平板,36±1℃,24±2hr

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　　报告↓↓

　　革兰氏染色乳糖发酵管,36±1℃,24±2hr

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　　G+G-,无芽孢杆菌产气不产气

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　　大肠菌群阴性大肠菌群阴性

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　　报告大肠菌群阳性报告

　　4.测定方法：

　　4.1检样稀释：

　　4.1.1以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中,经充分振摇成1：10均匀稀释液.

　　4.1.2用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水的试管中,振摇成1：100稀释液.

　　4.1.3重复5.1.2的操作,使成1：1000稀释液.

　　4.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择二个稀释度,每一稀释度接种3管,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管.1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管.然后置于36±1℃培

　　养箱内,培养24±2hr,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌

　　群阴性；如有产气者,则可按以下程序进行.

　　4.3分离培养：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养24hr后取出,观察菌落形态,并作革兰氏染色.

　　4.4证实试验：在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管,置于36±1℃温箱内培养24±2hr,观察产气情况.乳糖发酵管产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳性.

　　4.5报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数.