【求助】Real-timePCR引物设计求助通常real-timePCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的targetgene只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的

　　【求助】Real-timePCR引物设计求助

　　通常real-timePCR的引物要分别在两个外显子上,但我要研究的targetgene只有一个内含子,而且如果非要PCR产物跨过内含子的话所得出引物特别不好,不是有严重的错配就是有dimerorcrossdimer,得到的最好的一对primer如下：sense:5'GTCTTTCGGATTTCGCTm47.9,GC50,length16,none(hairpin,dimer,falsepriming,crossdimer)anti-sense:5'TCGAGGATTTCAACACTGTTm47.2,GC42.1,length19,founddimer(自由能-7.3)noneothersproductssize：209我觉得这对引物的Tm值过低,产物又过长,请问各位前辈,这对引物能用于定量PCR中吗?如果我们设计的引物在一个外显子上对定量的影响有多大?有什么办法可以减小引物在一个外显子上对定量的影响?