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  westernblot图中,IPIBFlag左边那些VEGFR-3-Flag,p85α-HAIB:FlagIB:HA我稍微有点明白了,但还是有几点不明白:(1)“从最右边看,表示细胞再转染了这三种质粒后,能够在细胞中表达”怎么看出来

  westernblot图中,IPIBFlag

  左边那些VEGFR-3-Flag,p85α-HAIB:FlagIB:HA

  我稍微有点明白了,但还是有几点不明白:

  (1)“从最右边看,表示细胞再转染了这三种质粒后,能够在细胞中表达”怎么看出来表达了?为什么要做lysate的westernblot图呢?

  (2)你说的看最右边、中间、左边的图是指最右边、中间、左边上下两个图对着比较吗?(3)你说的“研究片段”指的是SH2?

  (4)还有拉不拉不出来怎么看?互相之间能被拉就是说有相互作用?比如说最左边的图是不是应该看左下图左右之间的条带粗细对比,中间的图是看中上图左右之间的条带粗细对比

  (5)‘相互作用的位点不在其SH2上“这个结论不懂,既然是缺失SH2的P85不能被VEGFR拉出,但正常的P85能被VEGFR拉出,不正说明了作用位点在SH2上吗?

  还望大神不吝赐教!菜鸟跪谢啦

6回答
2020-11-07 03:46
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傅思遥

  IB是免疫印记、IP是免疫共沉淀、Flag和HA都是一种蛋白标签

  从最右边看,表示细胞再转染了这三种质粒后,能够在细胞中表达,最左边的图是用带有Flag标签的VEGFR拉p85及其研究片段,从图中可以看出,p85被拉出,而其研究片段没有被拉出,中间的图是反过来用p85及其研究片段拉VEGFR,同样可以看出p85可以把VEGFR拉出,而其研究片段没有被拉出,结论是VEGFR与P85存在相互作用,但是相互作用的位点不在其SH2上

2020-11-07 03:50:18
何彦志

  这些概念我百度到了,主要是我不明白这图应该怎么看啊?

2020-11-07 03:52:21
傅思遥

  后边我说的很详细了,希望能帮到你

2020-11-07 03:53:48
何彦志

  大神,能再帮我解答一下吧,问题有点多没法追问,我添加到问题里啦!谢谢!

2020-11-07 03:58:02
傅思遥

  能不能拉出来都需要对比着条带的位置去看,如果那个地方有条带,代表能拉的出来。做lysate的westernblot图是为了证明质粒是可以正常表达的,也就是说质粒是没有问题的,这是前提。由于毕业太久了,对一些表示方法有些淡忘,这里更正一下,非常抱歉,结论应该是VEGFR与P85存在相互作用,相互作用的位点在其SH2上。非常抱歉

2020-11-07 04:01:59
何彦志

  真的很感谢你耐心的解答!谢谢!

2020-11-07 04:04:54

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