1核酸变性

　　核酸的变性主要指DNA的变性.核酸变性时双链间的氢键断裂成单链,但并不涉及共价键的断裂.引起DNA变性的因素很多,如高温引起的热变性,酸碱改变引起的酸碱变性等.

　　2DNA热变性现象

　　当把DNA的稀盐溶液加热到80℃～100℃时,双螺旋结构即发生解体,两条链分开形成无规则线团.同时,一系列物化性质发生改变：260nm处紫外吸收值升高,粘度降低,浮力密度升高.由于二级结构的丧失,也失去了部分或全部生物活性.

　　3增色效应和减色效应

　　当DNA分子加热变性后,其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象称为增色效应.变性DNA复性后,在260nm处的吸收值减少的现象称为减色效应.

　　4DNA的复性

　　变性DNA在适当条件下,又可使两条彼此分开的多核苷酸链重新结合成为双螺旋结构,以上过程称为复性.复性的条件是：(1)变性DNA只有在缓慢冷却时才能复性.如果DNA在沸水浴中加热数分钟后,骤然在冰浴中冷却至低温,DNA不能复性,这也是防止复性的方法.(2)DNA浓度愈大,复性愈快.(3)DNA片段愈长,复性也愈快.

　　5核酸分子杂交

　　DNA杂交是指不同来源的DNA经热变性后,在慢慢冷却的复性过程中,由于异源DNA之间的某些区域有相同的序列,可以彼此结合形成杂交分子,称此方法为DNA分子杂交.DNA也可与互补的RNA之间发生杂交,形成DNA—RNA杂交分子.

　　核酸杂交可在液相或固相上进行,由于硝酸纤维素膜只吸附变性DNA,故常用硝酸纤维素膜作核酸杂交的支持介质.

　　6如何应用核酸的紫外吸收

　　由于嘌呤和嘧啶在240nm～290nm紫外线处表现出强烈的吸收性能,所以可以利用紫外分光光度计测定碱基、核苷、核苷酸和核酸,它们的最大吸收峰值在260nm附近.不同核苷酸有不同的吸收特性,可以此作定性定量检测.

　　在研究中常用紫外分光光度计检测少量的DNA和RNA,纯样品和不纯样品的检测根据是：

　　纯DNA：OD260／OD280＝1．8

　　纯RNA：OD260／OD280＝2

　　样品中如含杂蛋白及苯酚(它们在紫外也有吸收),比值明显降低,故不纯样品不能用此法定量.

　　7熔解温度(Tm）是指什么?受什么因素影响?

　　DNA变性的特点是爆发式的,变性作用发生在一个很窄的温度范围内.通常把DNA双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的熔解温度（Tm）或称熔点.DNA的Tm值一般在70℃～80℃之间.

　　影响DNA的Tm值的因素有：

　　(1)DNA的均一性.均一性愈高的样品,熔解过程愈是发生在一个很小的范围内.

　　(2)G—C之含量.由于G—C之间有3个氢键,因此G—C含量愈高,其Tm值也愈高,成正比关系.所以测定Tm值,可推算出G—C对的含量,其经验公式为：G—C％＝（Tm－69．3）×2．24.

　　（3）介质中离子强度的影响.一般来说,离子强度愈低的介质中,DNA的熔解温度也较低,且熔解温度范围也较窄.所以DNA制备应保存在较高浓度的缓冲液中,常在1mol·mL－1的NaCl溶液中保存.