这个体系是TaKaRa反转录试剂盒中的体系,稍有不同的是第二个PrimeSciptTMRTEnzymeMixI,试剂盒中为0.5μL.TotalRNA试剂盒中没有标明使用量,根据自己提取的RNA浓度来确定,但你这里的使用量应该有点大,试剂盒中有说明,10μL体系可最大使用500ng的TotalRNA.这是其中的一个反转录体系,还有另一个,不同点可以自己去看试剂盒说明书.

　　5×PrimeScriptTMBuffer中含有dNTPMixture和Mg2+.

　　Random6mers为随机的6核苷酸引物,引物序列为5'-(P)NNNNNN-3',其5'端和3'端均含有-OH,因此可往两端延伸,特点是产物量大,特异性差,适用于长的或具有Hairpin构造的RNA.包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物.

　　OligodTPrimer适用于具有Poly（A）Tail的RNA,因而特异性好,但因其只结合PolyA尾巴,对于较长的mRNA,经常不能延伸到5'端.（原核生物的RNA、真核生物的rRNA、tRNA以及某些种类真核生物的mRNA等不具有Poly（A）Tail）.

　　两种引物可据实际情况使用一种,也可同时使用.还有一种情况,当只扩增一种目的基因时,也可以使用SpecificPrimer（PCR时的下游引物）作为反转录引物.

　　这个体系是基于采用的TotalRNA模板非常良好或已经处理而建立的,因而体系中没有加入RNaseInhibitor.

　　最好自己认真看下试剂盒说明书.