请检查一下你的实验步骤和条件是否有差.

　　大肠菌群是一群需氧和兼性厌氧的,能在37℃培养24h内使乳糖发酵产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌,包括埃希氏菌属（Escherichia）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter）、肠杆菌属（Enterobacte）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）等,又称总大肠菌群（total coliform）.它们随粪便进入水体后,某些菌株可适应新环境而发生后继繁殖,成为天然菌系的一部分.为把它们与粪便中的大肠菌群区分开来,将培养温度提高至44.5℃±0.2℃,在该温度下仍能生长并发酵乳糖产酸产气的称为粪大肠菌（feacal coliform）.

　　二、步骤和方法

　　检测大肠菌群的标准方法有多管发酵法和膜滤法.

　　（一）多管发酵法（即最大可能数法,most probable number,简称MPN法）

　　于一系列发酵管中接种一定量水样,根据乳糖发酵产酸产气的阳性管数,测知水样含大肠菌群数.

　　1．总大肠菌群

　　（1）初发酵试验 以无菌操作术向各乳糖蛋白陈培养液发酵管（瓶）内注入一定量水样,混匀后置37℃温箱培养24h.产酸产气者为阳性.阴性者继续培养24h±3h再行检查.混浊而无气泡者,轻摇试管,注意观察有无小气泡上浮.有小气泡不断上浮,表示发酵正活跃,否则判为阴性.

　　接种水样量、平行管（瓶）数参考如下：

　　饮用水100ml,2瓶；10ml 10管

　　未污染水10ml、1ml、0.1ml各5管

　　受污染水0.1ml、0.01ml、0.001ml各5管

　　污水0.001ml、0.0001ml、0.00001ml各5管

　　这里,0.1ml即稀释10倍的水样1ml,余类推.接种水样量大（10ml、100ml）的管（瓶）内培养液应是浓缩液,使其在加入水样后为单倍浓度（普通浓度）.

　　（2）平板分离 轻摇初发酵试验阳性管,用接种环或一端挠起的接种针以无菌操作术取上述各阳性管的培养物,分别在伊红美兰平板上划线接种,平板倒置于37℃温箱培养18h～24h.呈深紫红色、有或无金属光泽的菌落,为典型大肠菌菌落,粉红色、粘液状、不透明的为非典型菌落,其他状态的均为阴性菌落.

　　（3）复发酵试验 取典型或非典型菌落（无典型菌落时取非典型菌落）的部分培养物作涂片,革兰氏染色,镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则取该菌落的另一部分培养物再接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管内,每管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1个～3个.置37℃温箱培养24h,产酸产气者证实有总大肠菌群存在.

　　（4）报告 根据证实有总大肠菌群存在的阳性管数,查表（见表5－1）,并按初发酵试验接种水样量换算后,报告每升水样的总大肠菌群数.对表中未能列入的组合,以及当试管数和稀释情况不同时,可利用托马斯（Thomas）氏公式来计算：