利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄．该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoRⅠ、SmaⅠ、NaeⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点．请回答：（1）上述限制酶在特定位点切割DNA，其实

　　利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄．该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoRⅠ、SmaⅠ、NaeⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点．

　　请回答：

　　（1）上述限制酶在特定位点切割DNA，其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的___切割后产生了___末端．

　　（2）利用EcoRⅠ和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的质料连接成重组质料，原因是___．

　　（3）重组质料导入番茄后，欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用___作探针．

　　（4）利用抗冻蛋白制备出相应的___，然后进行抗原-抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功．因此，还应将转基因番茄___，以确定其耐寒能力是否提高．