A、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，利用甲基绿和吡罗红混合染色剂对细胞染色，同时显示DNA和RNA在细胞中的分布，而大肠杆菌是原核细胞，DNA主要集中在拟核，则绿色有集中区域，A错误；

　　B、无水乙醇的作用是提取色素，若溶剂量多大，则色素的浓度降低，会导致收集到的滤液绿色过浅，B正确；

　　C、观察细胞有丝分裂中，分裂期时间时间长，在占细胞周期的比例大，观察到染色体机会越大，但如果细胞高度分化，则观察不到染色体，C错误；

　　D、显微镜下观察到着丝点排列在赤道板上的减数分裂时期细胞，处于减数第二次分裂的中期，D错误．

　　故选：B．