一)实验器材和用品

　　1．菌种

　　大肠杆菌（Escherichiacoli）K12SF+

　　2．培养基

　　1)LB液体培养基：10mL/三角瓶*4

　　2)2倍LB液体培养基:3mL/管*2

　　3)LB固体培养基：250mL/三角瓶*1

　　4)基本固体培养基：300mL/三角瓶*1

　　5)无N基本液体培养基：5mL/三角瓶*1

　　6)2N基本液体培养基：5mL/管*1

　　3．混合氨基酸和混合维生素

　　氨基酸分七组,其中6组每组6种氨基酸,每种氨基酸等量研细充分混合（若所用氨基酸为dl型,量需加倍）.

　　Ⅰ

　　赖

　　精

　　甲硫

　　半胱

　　嘌

　　胱

　　Ⅱ

　　组

　　精

　　苏

　　谷

　　天冬

　　嘧

　　Ⅲ

　　丙

　　甲硫

　　苏

　　羟脯

　　甘

　　丝

　　Ⅳ

　　亮

　　半胱

　　谷

　　羟脯

　　异亮

　　缬

　　Ⅴ

　　苯丙

　　胱

　　天冬

　　甘

　　异亮

　　酪

　　Ⅵ

　　色

　　嘌

　　嘧

　　丝

　　缬

　　酪

　　Ⅶ

　　脯

　　Ⅷ

　　混合维生素（B1、B2、B6、泛酸、对氨基苯甲酸,烟碱酸及生物素等量研细,充分混合）

　　1.菌液制备：将大肠杆菌K12接种于装有10mlLB培养基的三角瓶中,37oC过夜培养.取0.3ml接于10mlLB培养基的三角瓶37oC培养5h.分装于2个5ml的离心管中8000r/min,3次；弃上清各加2ml的生理盐水,打匀,混合,制成4ml菌悬液.

　　2.uv诱变：3ml菌悬液倒入小培养皿（　7cm　）内,将培养皿至于紫外灯下,连同盖一起灭菌1min,然后打开皿盖照射3-4min.加入3ml的　2LB　培养基,然后暗箱培养12小时以上.

　　3.青霉素淘汰野生型：取3ml菌液,8000r/min离心3min收集菌体.加4ml生理盐水离心洗涤三次,制成3ml菌液.取0.1ml,加到无N基本培养基（5ml）,37oC培养12h以上.然后加2N基本培养基5ml和适量的青霉素钠盐,37oC培养.

　　4.缺陷性的检出与培养：12、16、24小时的培养物中分别取0.1ml进行涂布（LB、基本培养基各一个）37oC培养36-48小时.选择选取完全培养基上的菌落数大大超过基本培养基的那一组,用灭菌牙签跳去完全培养基上长出的菌落200个分别点种与基本与完全培养基平板上,线基本后完全.37oC培养.

　　5.复证：挑取LB培养基上有而基本上没得菌落,在基本培养基上划线复证,并在完全培养基上保留备份.24小时后仍不长的为缺陷型.

　　6.鉴定：待测缺陷型接于10mlLB中,37oC培养12-16小时.8000r/min离心3min收集菌体,加入4ml生理盐水离心洗涤.制成4ml菌悬液.取1ml倾注基本平板,皿底分9格,用接种环依次放入氨基酸及维生素,其中一格作为对照不接入任何的营养物质,37oC培养2h

　　可能比较复杂不好意思这是我尽力了

　　如满意请及时采纳谢谢

　　如有疑问请追问