考玛斯蓝染料结合法

　　(一)目的

　　学生用考玛斯蓝方法测定蛋白质含量.

　　(二)材料用具及仪器药品

　　白菜梗,水果汁,721型分光光度计,电子天平,容量瓶,移液管

　　标准牛血清蛋白溶液:称取牛血清蛋白10mg,溶于100ml蒸馏水中,浓度为100ug/ml.

　　染料试剂:称取考玛斯蓝G—250(CoomassidbrilliantblueG—250)60mg,溶于100ml13%过氯酸溶液中,滤去未溶解的染料,贮于棕色瓶中.

　　(三)原理

　　考玛斯蓝溶液为棕褐色,若与蛋白质结合则为蓝色,溶液蓝色的深浅代表蛋白质含量的高低,蓝色越深,表明蛋白质含量越高.

　　(四)方法步骤

　　1.以第列不同浓度(1—50ug)的标准牛血清蛋白溶液2ml,分别加入染料试剂2ml,立即混匀,于分光光度计波长620nm测定光密度,以蒸馏水2ml加染料试剂2ml,作为比色空白对照,

　　2.称1g白菜梗(或豆芽水果),放在研钵中研磨成匀浆,用水定量至25ml,过滤.取2ml滤液,用上述同样的方法,测定样品溶液的光密度.然后从标准曲线上查得蛋白质浓度.

　　3.计算所测样品中蛋白质含量.

　　(五)实验报告

　　计算所测材料的蛋白质含量.

　　(六)思考题

　　用考玛斯蓝染料结合法测定蛋白质含量有什么优缺点