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  粗多糖提纯的方法有哪些

  粗多糖提纯的方法有哪些

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2020-04-24 17:26
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陈薇

  一、多糖的提取

  1热水浸提法

  其步骤为:原料→粉碎→脱脂→粗提(2-3次)→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥

  2微波辅助提取法

  3超声波辅助法与常规提取法相比,具有提取时间短、产率高、无需加热等优点[17].

  4索氏提取法:(索氏提取器中,石油醚)

  5醇提法:(乙醇)

  醇提法方法简单,易于操作,但提取率较低,乙醇使用量大,不宜大规模提取使用.

  6其它方法:

  多糖的提取方法还有稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等.但由于稀酸、稀碱条件下,易使多糖发生糖苷键的断裂,部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少,因而很多试验中避免采用稀碱液浸提法和稀酸液浸提法.

  二、多糖的纯化

  多糖中杂质除去方法粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质,必须分别除去.

  1除蛋白质常用的方法有

  1)沙维积法(Sevag法):

  2)三氟三氯乙烷法

  3)三氯醋酸法

  4)酶解法:在样品溶液中加入蛋白质水解酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等,使样品中的蛋白质降解.通常将其与Sevag法综合使用除蛋白质效果较好.

  5)盐酸法:取样品浓缩液,用2mol/L盐酸调节其PH至3,放置过夜,在3000r/min条件下离心,弃去沉淀,即脱去蛋白质.

  6)其它方法:可以加入5%ZnSO4溶液和饱和Ba(OH)2溶液,振荡后离心去蛋白.此法除蛋白不够彻底,可结合Sevag法使用.还可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉淀完全,在4000r/min的条件下离心10min,收集上清液,即为除蛋白液.

  还有人使用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白,将混合液清摇,再静置,取上清液.此过程需重复多次方可除尽蛋白.

  除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验,观察在280mm处是否有吸收,如果无吸收则表明蛋白质已经除尽.

  2除色素

  1)活性炭

  2)弱碱性树脂:对于植物来源的多糖,可能含有酚型化合物而颜色较深,这类色素大多呈负性离子,不能用活性炭吸收剂脱色,可用弱碱性树脂DEAE纤维素或DuoliteA-7来吸附色素.

  3)氧化脱色:若糖和色素时结合的,易被DEAE纤维素吸附,不能被水洗脱,这类色素可进行氧化脱色:以浓氨水或NaOH液调至PH8.0左右,50℃以下滴加H2O2至浅黄色,保温2小时.

  4)乙醚和无水乙醇洗涤:依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇洗涤多糖,即可得到较为纯净的多糖.此法较为简单,便于操作,多糖损失也较小.

  5)用4:1的氯仿-正丁醇除色素.操作简单,多糖有一定损失.

  6)发酵来源的多糖颜色一般较浅,色素含量较少,一般可不除色素.

  3除低聚糖等小分子杂质

  1)采用逆向流水透析法.即准备好一桶蒸馏水,用一根导管将水通入透析袋的烧杯底部,另用一根导管将水引出,根据水量控制流速,使水缓慢流动48小时.这样得到的就是多糖的半精品.

  2)利用溶液浓度扩散效应,将分子量小的物质如无机盐、低聚糖等从透析袋渗透到袋外的蒸馏水中,不断换水即可保持浓度差,从而除尽小分子杂质.具体的做法是根据多糖溶液的体积截取相应长度的透析袋,用透析夹夹住一端,灌入多糖液,离液面2-3cm处夹紧透析袋,置于一大烧杯中,注入蒸馏水至完全浸没透析袋后,用磁力搅拌器慢速搅拌,每12小时换一次水,重复3-4次.

2020-04-24 17:31:39

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