①用“真空渗水法”探究影响光合作用的因素实验，将叶片打碎，利用真空抽出叶片内的空气，再使水渗透进叶片，充满然后在仪器中，测定单位时间一定光强下叶片光合作用产生并释放到水中的氧气，所以叶片上浮的数量是反映实验结果的指标，①正确；

　　②果蝇的唾液腺是多线染色体．其形成是由于唾液腺细胞的染色体经过多次复制，而细胞并没有分裂，同时同源染色体发生体联会（非生殖细胞的联会）所致，②错误；

　　③青蛙体液的浓度约为0.9%，因此该实验所用的生理盐水的浓度为0.9%，③错误；

　　④用叶绿体色素提取液在层析纸上划线过粗，导致色素分布不均匀，易造成三种色素带分离效果不佳，④正确．

　　故选：B．