A、高秆抗锈病小麦和矮秆易染锈病小麦杂交获得矮秆抗锈病优质品种，育种方法是杂交育种，原理是基因重组，只能产生新的基因型，A错误；

　　B、用秋水仙素诱导二倍体西瓜获得四倍体西瓜，育种方法是多倍体育种，原理是染色体变异，只能产生新的基因型，B错误；

　　C、用花药离体培育出单倍体小麦植株，原理是染色体变异，不能产生新基因，C错误；

　　D、用X射线、紫外线处理青霉菌获得青霉素高产菌株，育种方法是诱变育种，原理是基因突变，能产生新的基因，D正确．

　　故选：D．