胶原蛋白的测定方法和原理或者说下下面这个实验叫什么方法和它的原理5.1药品配制5.1.1硫酸溶液[c(H2SO4)≈3mol/L]x05量取750mL水于2L的容量瓶中,在搅拌下缓慢加入320mL浓硫酸（）.冷却至

　　胶原蛋白的测定方法和原理或者说下下面这个实验叫什么方法和它的原理

　　5.1药品配制

　　5.1.1硫酸溶液[c(H2SO4)≈3mol/L]

　　x05量取750mL水于2L的容量瓶中,在搅拌下缓慢加入320mL浓硫酸（）.冷却至室温后用水定容.

　　5.1.2缓冲溶液（pH=6.8）

　　将26.0g一水柠檬酸、14.0g氢氧化钠和78.0g无水乙酸钠用500mL水溶解,转入1L容量瓶,加入250mL正丙醇,用水定容.该溶液于4℃暗处可稳定保存几周.

　　5.1.3氯胺T溶液

　　称取1.41g三水N-氯-对甲苯磺酰胺钠盐（氯胺T）,用100mL缓冲溶液溶解,临用前配制.

　　5.1.4显色剂

　　称取10.0g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸溶液（质量分数60%）溶解,缓慢加入65mL异丙醇.临用前配制.

　　5.1.5羟脯氨酸标准溶液

　　x05标准储备液：称取50mg4-羟基-α-吡咯甲酸（羟脯氨酸）于100mL容量瓶中,用水溶解,加一滴硫酸溶液,用水定容.该溶液4℃下可稳定存放1个月.

　　x05标准工作液：移取5.00mL上述标准储备液至500mL容量瓶中,用水定容.分别吸取该溶液10、20、30和40mL于100mL容量瓶中,用水定容,所得标准工作液浓度依次为0.5、1.0、1.5和2.0.临用前配制.

　　5.2

　　5.2.1样品前处理

　　x05将鱼皮流水解冻,去除多余碎肉及脂肪,清洗干净,吸油纸吸去表面水分,剪碎.

　　5.2.2样品水解

　　x05精确称取4g鱼皮放入烧瓶中,避免粘在烧瓶壁上,加入30mL硫酸溶液,用表面皿盖住,在105℃干燥箱内恒温16h.

　　x05用圆形滤纸趁热将水解产物过滤至250mL容量瓶中,用10mL硫酸溶液分三次洗涤烧瓶和滤纸,合并至上述容量瓶,用水定容,摇匀.用移液管移取10mL该水解液至250mL容量瓶中,定容摇匀.

　　5.2.3测定

　　x05移取4.00mL上述溶液于比色管中,加入2.00mL氯胺T试剂,混合后于室温下放置20min.

　　x05加入2.00mL显色剂于比色管中,充分混合,用塑料薄膜将比色管封口,迅速放入60℃水浴中加热20min.

　　x05取出比色管,流水冷却比色管至少3min,室温下放置30min.

　　x05用水做参比,于558nm处测吸光值.平行两组.

　　x05用蒸馏水代替稀释溶液做对照实验.

　　5.2.4标准曲线

　　x05用4.00mL羟脯氨酸标准工作液一次代替稀释后的水解产物,进行同样操作；

　　x05以扣除了空白吸光值的标准工作液的吸光度为纵坐标,以相应的浓度为横坐标,绘制标准曲线.