在实际测量中,采用在另一等同的吸收池中放入溶剂与被分析溶液的透射强度进行比较,即：A=lg(I溶剂/I溶液)≈lg(I0/I)吸光度具有加和性：A总λ=A1λ+A2λ+…Anλ比尔定律应用的局限性：只适用于稀溶液、化学偏离、仪器偏离

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　　4.2紫外一可见分光光度计

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　　1.光源功能：提供能量激发被测物质分子,使之产生电子光谱谱带（提供宽带辐射）.连续光源：广泛应用在吸收和荧光光谱中(气体放电光源)氘灯、氢灯紫外可见氩灯真空紫外氙灯真空紫外、紫外、可见(热辐射光源)钨丝灯、卤钨灯可见光区

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　　2.单色器功能：从光源辐射的复合光中分出单色光.3.吸收池功能：盛放分析试样（一般是液体）

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　　4.检测器功能：检测光信号,测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置.5.信号显示系统

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　　6.紫外一可见分光光度计的类型(1)单波长单光束分光光度计缺点：测量结果受电源波动的影响较大,误差较大.

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　　(2)单波长双光束分光光度计优点：除了能自动扫描吸收光谱外,还可自动消除电源电压波动的影响,减小放大器增益的漂移.

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　　(3)双波长分光光度计优点：在有背景干扰或共存组分的吸收干扰的情况下,可以对某组分进行定量测定.还可以获得微分光谱和进行系数倍率法测定.

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　　(4)多道分光光度计具有快速扫描的特点

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　　4.3化合物电子光谱的产生4.3.1有机化合物的紫外一可见吸收光谱（一）跃迁类型在紫外可见光区范围内,有机化合物的吸收带主要由σ→σ*、n→σ*、π→π*和n→π*跃迁产生,其相对能量大小次序为：σ→σ*>n→σ*>π→π*>n→π*.

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　　σ∗π∗nπσσσ∗σπ∗πσ∗nσ∗ππ∗nπ∗有机化合物分子中电子跃迁的能量

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　　σ→σ*跃迁：分子中的成键σ电子跃迁到σ*反键轨道上去,这是一切饱和有机化合物都可能产生的电子跃迁类型.n→σ*跃迁：分子中未成键的n电子激发到σ*轨道上去,所有含有杂原子的饱和烃衍生物都可发生这种跃迁.含有σ→σ*、n→σ*跃迁的化合物,如：饱和烷烃、卤代烷烃、醇、醚等是紫外可见吸收光谱测定时的良好溶剂.

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　　•π→π*跃迁：可以发生在任何具有不饱和键的有机化合物分子中,其最大摩尔吸光系数εmax很大.•n→π*跃迁：发生在含有杂原子的不饱和化合物中,其最大摩尔吸光系数εmax比较小.•电荷迁移跃迁：当外来辐射照射某些化合物时,电子从体系具有给予体特性的部分转移到该体系具有电子接受体特性的部分所发生的跃迁.其谱带较宽,吸收强度大,εmax>104.

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　　NR1R2NR1R2+-hυ电子接受体电子给予体CC+hυ电子接受体电子给予体OROR-

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　　（二）常用术语1.生色团：分子中可以吸收光子而产生电子跃迁的原子基团.（含有π键的不饱和基团）2.助色团：有些基团本身没有生色作用,但却能增强生色团的生色能力,即它们与生色团相连时,会使其吸收带是最大吸收波长发生红移,并且增加其强度.通常是带有非键电子对的基团.3.红移和紫移：吸收带的最大吸收波长发生移动,向长波方向移动称为红移,向短波方向移动称为紫移.

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