1.核糖体大、小亚基的分离起始因子3（initiationfactors,IF-3）3和IF-1和核糖体结合,使核糖体大、小亚基分开,以利于mRNA和fMet-tRNA结合到核糖体小亚基上.

　　2.mRNA与小亚基结合原核生物中每一个mRNA的5＇-端都具有核糖体结合位点,它是位于AUG上游8~13个核苷酸处由4~6个核苷酸组成的富含嘌呤的序列,又称为SD序列.这段序列正好与30S小亚基中的16srRNA3’端一部分序列互补,因此SD序列又称为核糖体结合位点（ribosomalbindingsite,RBS）.紧接SD序列的小段核苷酸又可以被核糖体小亚基蛋白辨认.原核生物就是靠这种核酸-核酸、核酸-蛋白质之间的辨认结合把mRNA结合到核糖体的小亚基上.该结合反应需IF-3、IF-1的参与.

　　3.甲酰甲硫氨酰-tRNA的结合在IF-2作用下,fMet-tRNA与mRNA分子中的AUG相结合,即密码子与反密码子配对,此步需要GTP和Mg2+参与.

　　4.核糖体大小亚基结合fMet-tRNA结合后,IF-3脱离小亚基,随着IF-3的脱落,核糖体50S大亚基与30S小亚基结合形成70S的起始复合物.与此同时GTP水解,IF-1和IF-2脱离起始复合物,甲酰甲硫氨酰-tRNA占据P位,A位是空的,因此与mRNA上第二个密码子对应的氨基酰-tRNA即可进入A位.