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  【293T细胞是怎么包装病毒的我是新手,来实验室听师兄说将要过量表达的基因转入293T细胞,可以通过293T细胞包装病毒来收集,我想问下293T细胞是怎样将目的基因包装成病毒的】

  293T细胞是怎么包装病毒的

  我是新手,来实验室听师兄说将要过量表达的基因转入293T细胞,可以通过293T细胞包装病毒来收集,我想问下293T细胞是怎样将目的基因包装成病毒的

1回答
2020-05-16 05:17
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何宏声

  慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):

  第一天:

  1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度

  第二天:x09x09x09

  1.转染293FT细胞.

  1.500ulOpti-MEM稀释2ugpWPXLd-目的基因+1.5ugpsPAX2+1.5ugpMD2.G

  2.500ulOpti-MEM稀释15ullipofectamine2000

  3.5min后,将,溶液混合,室温静止30minx09

  4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.

  2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+

  10%FBS(从此刻开始算时间).

  第三天:

  3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上

  第四天:

  4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基

  4.感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.

  第五天:

  5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.

  6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.

  说句实话我是复制过来的,希望可以帮你.

2020-05-16 05:22:05

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