【卡那霉素培养基的作用是什么?野生型和转基因拟南芥在上面的表-查字典问答网
分类选择

来自刘亦书的问题

  【卡那霉素培养基的作用是什么?野生型和转基因拟南芥在上面的表现有何不同】

  卡那霉素培养基的作用是什么?野生型和转基因拟南芥在上面的表现有何不同

1回答
2020-05-16 16:11
我要回答
请先登录
马菲

  拟南芥是一种模式植物,多年来围绕拟南芥的相关研究很多,尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门,相关的论文也有很多.原因主要有以下几个方面:

  1拟南芥是一种模式植物,基因组小,克隆其基因比较简单.

  2种植方便,条件易得.

  3拟南芥是自花传粉植物,这样既很容易进行遗传分析.

  4方法简单,不同于传统的植物转基因,不需要植物组织培养阶段,对于实验操作的要求不是很高.

  当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化(载体法),区别主要是转化的方法不同,有抽真空,花序浸染和喷雾法使用最为广泛.

  1农杆菌介导转化的基本流程编辑

  农杆菌(目标载体)液的制备↘

  拟南芥种植→花期(侵染)→共培养→收种→验证

  2农杆菌制备编辑

  1)从-80℃冰箱中取出lml农杆菌.

  2)LB培养基中添加50mg/L的卡那霉素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif).

  3)把lml农杆菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培养基中,28℃振荡10h.

  4)拟南芥转基因浸润液采用的是1/2MS,加蔗糖50g/L,PH值调至5.7.然后在15p压力下蒸汽灭菌15min,灭菌结束,冷却后保存于4℃,以待转基因使用.

  3转化编辑

  抽真空/花序浸染/喷雾法

  其中抽真空法转化效率最高,但是步骤麻烦,而且要将拟南芥倒置浸染到菌液中,操作不方便.喷雾法相比来说简便易行,而且进行重复浸染,可以提高转化效率.

  4验证编辑

  1.种子筛选,将收到的种子种植于含有筛选剂(卡那霉素/潮霉素等)的培养基上,筛选出抗性幼苗.

  2.PCR,提取拟南芥基因组,进行PCR扩增,核酸电泳观察有无目的基因.

2020-05-16 16:12:35

最新问答

推荐文章

猜你喜欢

附近的人在看

推荐阅读

拓展阅读

  • 大家都在看
  • 小编推荐
  • 猜你喜欢
  •