关于过氧化氢酶活性测定问题,急急急!!!下面是我用的测定过氧化氢酶活性方法:对于这个实验方案,我有两个不明白的地方:1.计算公式的1.7是不是随着高锰酸钾标准液浓度的变化而
关于过氧化氢酶活性测定问题,急急急!!!
下面是我用的测定过氧化氢酶活性方法:对于这个实验方案,我有两个不明白的地方:1.计算公式的1.7是不是随着高锰酸钾标准液浓度的变化而变化,比如说我测定前标定的高锰酸钾标准液浓度为0.09mol/L,那我这个系数就不是1.7了,是不是得重新计算????
2.在这个实验中每次测定前要求标定过氧化氢标准溶液的浓度,我不明白的是为什么要标定,在计算公式或者换算中也没有用到过氧化氢标准溶液的浓度,为什么要标定呢,如果不标定对结果有什么影响????
过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法)
一、原理
过氧化氢酶(catalase)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料:小麦叶片
(二)仪器设备:1.研钵;2.三角瓶;3.酸式滴定管;4.恒温水浴;5.容量瓶。
(三)试剂:1.10%H2SO4;2.0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液;3.0.1mol/L高锰酸钾标准液称:取KMnO4(AR)3.1605g,用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml,再用0.1mol/L草酸溶液标定;4.0.1mol/LH2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L,取30%H2O2溶液5.68ml,稀释至1000ml,用标准0.1mol/LKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定;5.0.1mol/L草酸:称取优级纯H2C2O4.2H2O12.607g,用蒸馏水溶解后,定容至1000ml。
三、实验步骤
(一)酶液提取:取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量,研磨成匀浆,转移至25ml容量瓶中,用该缓冲液冲洗研钵,并将冲洗液转至容量瓶中,用同一缓冲液定容,4000rpm离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
(二)取50ml三角瓶4个(两个测定,另两个为对照),测定瓶加入酶液2.5ml,对照加煮死酶液2.5ml,再加入2.5ml0.1mol/LH2O2,同时计时,于30℃恒温水浴中保温10min,立即加入10%H2SO42.5ml。
用0.1mol/LKMnO4标准溶液滴定,至出现粉红色(在30min内不消失)为终点。
四、结果
酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示:
过氧化氢酶活性(H2O2mg/g/min)=(A-B)×VT×1.7/(W×VS×t)
式中:A对照KMnO4滴定ml数;B酶反应后KMnO4滴定ml数;VT提取酶液总量(ml);VS反应时所用酶液量(ml);W样品鲜重(g);t反应时间(min);
1.7ml0.1mol/LKMnO4相当于1.7mgH2O2。
希望做过或是明白这个实验的专业人士回答,万分感谢!!!