生物实验中试剂的作用及实验方法总结 一．化学物质的检测方法 ①淀粉——碘液 (蓝色) ②还原性糖——斐林试剂\班氏试剂(砖红色) ③CO2——Ca(OH)2溶液(澄清石灰水变浑浊) ④乳酸——pH试纸 ⑤有O2——余烬复然；无O2：火焰熄灭 ⑥蛋白质——被蛋白酶水解 、双缩脲试剂(紫红色) ⑦脂肪——苏丹Ⅲ染液 (橘黄色）、苏丹Ⅳ染液 (红色） ⑧DNA——甲基绿；RNA——吡罗红 ⑨染色体——龙胆紫溶液，醋酸洋红溶液 ⑩线粒体——健那绿 二．实验条件的控制方法 1、增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物 2、减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水 3、除去容器中CO2——NaOH溶液 4、除去叶中原有淀粉——置于黑暗环境一昼夜 5、除去叶中叶绿素——酒精水浴加热 6、除去光合对呼吸干扰——给植株遮光 7、如何得到单色光——棱镜色散或透明薄膜滤光 8、血液抗凝——加入柠檬酸钠 9、各种细胞器的提取——细胞匀浆离心 10、骨的脱钙——盐酸溶液 11、灭菌方法——培养基用高压蒸汽灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂冼净，擦干后用75%酒精消毒；实验室或接种箱用甲醛蒸汽或紫外灯灭菌；整个过程都在实验室无菌区或酒精灯旁进行。 三．实验结果的显示方法 ①光合速度——O2释放量或CO2吸收量或有机物生成量 ◆水生植物可依气泡的产生量或产生速率； ◆离体叶片若事先沉入水底可依单位时间内上浮的叶片数目； ◆植物体上的叶片可依指示剂（如碘液）处理后叶片颜色深浅。 ②呼吸速度——O2吸收量或CO2释放量或有机物消耗量 ③原子或分子转移途径——放射性同位素示踪 ④细胞液浓度大小——质壁分离 ⑤植物细胞是否死亡——质壁分离；亚甲基蓝溶液染色 ⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量发育速度等 ⑦生长激素——生长速度(体重、身高变化) ⑧胰岛素作用——动物活动状态 ⑨菌量——菌落数，显微计数，亚甲基蓝褪色程度 四．实验中控制温度的方法 1、还原糖，DNA鉴定——沸水浴加热 2、酶促反应——水浴保温 3、用酒精溶解叶中的叶绿素——酒精要隔水加热、 4、细胞和组织培养以及微生物培养——恒温箱培养 五、实验中常用器材和药品和制剂的使用 1、NaOH：用于吸收CO2或改变溶液的pH 2、Ca(OH)2：鉴定CO2 3、CaCl2提高细菌细胞壁的通透性 4、HCl：解离或改变溶液的pH 5、NaHCO3：提供CO2 6、NaCl：配制生理盐水用于维持红细胞、口腔上皮细胞形态或用于提取DNA 7、琼脂：激素或其他物质的载体或培养基的凝固剂 8、亚甲基蓝：用于活体检测或检测污水的细菌含量（细菌可使之褪色） 9、酒精：用于消毒、提纯DNA、叶片脱色及配制解离液 10、蔗糖：测定植物细胞液浓度或观察质壁分离和复原、作为碳源和能源物质 11、滤纸：过滤或纸层析 12、纱布、尼龙布：过滤，遮光 13、龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色 14、柠檬酸钠：血液抗凝剂 15、碘液：鉴定淀粉 16、2，4-D生长素类似物：有双重性，低浓度促进生长；高浓度抑制生长；培育无籽果实。 17、10-4M的秋水仙素：a.诱发基因突变。b.使染色体加倍，培育多倍体。c. 单倍体育种，培育纯种。 18、10%KNO3溶液：植物细胞质壁分离和自动复原 19、层析液：分离色素 20、丙酮：溶解色素 21、紫外线：一定剂量作为能量、保温，高剂量导致细胞基因突变。 六、一些常见的实验方法 ⑴、根据颜色来确定某种物质的存在： 淀粉+I2(蓝色)；还原性糖+斐林试剂(砖红色)；脂肪+苏丹Ⅲ(橘黄)或+苏丹Ⅳ(红色)；蛋白质+双缩脲试剂(紫色)； 大肠杆菌+伊红和美蓝(菌落为深紫色，有金属光泽) ⑵、用颜色标记法来确定原肠胚三个胚层的分化情况。 ⑶、用荧光标记法来证明细胞膜具有一定的流动性 ⑷、同位素示踪法：光合作用产生氧气的来源； 光合作用中二氧化碳的去向；噬菌体侵染细菌实验证明DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质；DNA的复制是半保留复制。 ⑸、确定某种元素为植物生长必需的元素的方法：水培法(完全培养液与缺素完全培养液对照) ⑹、获得无籽果实的方法：用适宜浓度的生长素处理花蕾期已去雄的子房，如无籽蕃茄（或套袋涂抹生长素）、诱导染色体变异，如无籽西瓜。 ⑺、确定某种激素功能的方法：饲喂法，切除注射法，阉割移植法，切除口服法。 ⑻、确定传入、传出神经的功能：刺激+观察效应器的反应或测定神经上的电位变化。 ⑼、植物杂交的方法：雌雄同花：花蕾期去雄+套袋 +开花期人工授粉+套袋 雌雄异花：花蕾期雌花套袋+开花期人工授粉+套袋 ⑽、确定某一显性个体基因型的方法：测交； 该显性个体自交（花粉鉴定法）。 ⑾、确定某一性状为显性性状或隐性性状的方法：具有一对相对性状的纯合体的杂交自交，观察后代是否有性状分离。 ⑿、确定某一个体是否具有抗性基因的方法：确定小麦是否具有抗锈病基因，用锈病菌去侵染，一段时间后，观察有无锈斑出现。 ⒀、鉴定血型的方法：用标准血清与待测血型混合，在显微镜下观察血液的凝集情况。 ⒁、育种的方法：杂交育种；人工诱变育种；单倍体育种；基因工程育种；细胞工程育种；多倍体育种等。 ⒂、测定种群密度的方法：样方法； 标志重捕法 ⒃、生态瓶的制作方法；瓶必须透明，且封闭 ⒄、分离微生物的方法：平板划线法；用选择培养基培养(如：圆褐固氮菌的分离，金黄色葡萄球菌的分离，细菌和酵母菌的分离) ⒅、测定微生物群体生长的方法： 测定细菌的数目---显微计数；测定细菌的重量---取一定体积的培养基，经离心分离，反复洗涤后，称湿重，或烘干后称干重。 七、实验研究方法 1、显微观察法 如观察植物细胞有丝分裂的实验，观察植物细胞质壁分离和复原的实验。 2、观察法 观察微生物的外在性状和表现等，如观察注射了甲状腺激素的小狗的活动状况，观察动物的毛色和植物花色的遗传实验等。 3、同位素示踪法 如噬菌体侵染细菌的实验，用18O和14C追踪光合作用中氧原子和碳原子转移途径的实验等。 4、加法创意 如用饲喂法研究甲状腺激素的实验、用注射法研究生长激素的实验，用移植法研究性激素的实验等。 5、减法创意 如用阉割法、摘除法研究性激素、甲状腺激素、生长激素的实验，雌蕊授粉后除去发育着的种子实验等。 6、杂交实验法 如孟德尔发现遗传定律的植物杂交、测交的实验，小麦的杂交实验等。 7、化学分析法 如番茄和水稻对Ca 和Si选择吸收的实验，叶绿体中色素的提取和分离实验等。 8、理论分析法 如大小草履虫竞争的实验，植物根向地生长、茎背地生长的实验，植物向光性的实验等。 9、模拟实验法 如渗透作用的实验装置，分离定律的模拟实验等。 七、实验技术 1、光学显微镜的使用：适用于观察生物的微观结构，如细胞的结构，包括光镜下可看到的各种细胞器。 2、临时装片、切片和涂片的制作技术 适用于显微观察，凡需在显微镜下观察的生物材料，必须先制成临时装片、切片或涂片。如“观察植物细胞的质壁分离和复原的实验”中要制作洋葱表皮的临时装片，在生物组织中脂肪的鉴定中要制作花生种子的切片等。 3、研磨和过滤技术