复苏平板划线培养挑单菌落中试管扩增摇瓶扩增

　　1.复苏：根据所培养的细菌选择适宜的培养基,大部分细菌在LB培养基中在超净工作台先用1毫升左右的适宜的培养基溶解冷冻菌,然后转移到10毫升中试管（放入4毫升液体培养基）中,一般在37摄氏度摇床静止或低转速培养12小时或者过夜（温度取决于所培养的细菌适宜生长的温度）.

　　2.平板划线培养：在平板（琼脂+液体培养基）划线,放37摄氏度培养箱培养箱中倒置培养6小时~12小时,在平板上观察是否形成了单菌落.

　　3.挑单菌落：在超净台中挑选典型单菌落,置入10毫升中试管（内有5毫升液体培养基）中,在37摄氏度摇床,转速200转培养12小时或者过夜,肉眼能看到试管浑浊.

　　3.按照1：20的比例将中试管中的菌液移到250毫升三角瓶（放入100毫升液体培养基）,培养条件同前.注意：所有的接种操作均需要在层流罩中,培养基应无菌.